长大食品学院课件之二丨苯酚-硫酸法测定多糖含量

一．实验目的 掌握苯酚-硫酸法测定多糖含量的实验原理和方法 灵活运用该方法检测食品、保健品和医药等领域中的多糖含量 二．实验原理- 苯酚-硫酸法是一种经典测定多糖含量的方法。其原理是利用糖在浓硫酸的作用下，首先水解成单糖分子，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合形成橙黄色化合物，在490 nm波长下有最大吸收峰，且在一定浓度范围内，其吸光值与多糖含量成线性关系。从而可以利用分光光度计测定其吸光值，并利用标准曲线定量测定样品中的多糖含量。该方法具有简便、快速和灵敏的特点。可用于己糖、戊糖、甲基化糖和多聚糖的含量测定。 三．实验仪器与试剂耗材 试验仪器 恒温电加热烘箱、分析天平、瓶口分液器、可见分光光度计 试剂与耗材： 试剂：浓硫酸（分析纯）、6%苯酚（现配现用）、葡萄糖标准品； 耗材：50 mL容量瓶、5 mL移液管、1 mL移液管、玻璃试管若干 四．实验步骤 1. 对照标准品的溶液配制 将不少于50 mg的葡萄糖标准品 置于80℃恒温电加热烘箱中烘至恒重。 将葡萄糖标准品从烘箱中取出后， 使用分析天平准确称取葡萄糖标准品50 mg， 溶解于50 mL容量瓶中， 加入蒸馏水稀释至刻度线， 此时其浓度为1.0 mg/mL。 摇匀后准确使用5 mL移液管吸取5 mL， 置于50 mL容量瓶中， 加入蒸馏水稀释定容至刻度线， 即获得0.1 mg/mL的葡萄糖标准品溶液。 ， 五．结果与分析 将多糖样品测定值A1带入标准曲线的回归方程中，即：A1=0.0057×C样品+0.051；C样品=(A1-0.051)/0.0057；因此，多糖含量百分比W%=（C样品×1 mL）/(100 μg /mL×1 mL)× 100%。